流式檢測(cè)

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流式檢測(cè)

一、項(xiàng)目介紹

　　流式細(xì)胞術(shù)是運(yùn)用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞或顆粒進(jìn)行光譜鑒定、細(xì)胞分選、計(jì)數(shù)，廣泛用于分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子的表達(dá)水平、鑒定樣品中細(xì)胞群的不同細(xì)胞類(lèi)型、評(píng)估各細(xì)胞亞群的純度以及分析細(xì)胞大小和內(nèi)含顆粒。主要利用熒光標(biāo)記的抗體檢測(cè)蛋白水平，或結(jié)合了特定細(xì)胞分子的熒光染料，如PI與 DNA 的結(jié)合。

二、應(yīng)用

　　常用于細(xì)胞表面分子如表面標(biāo)記物的鑒定及水平分析，以鑒定、定性或定量特定類(lèi)群的細(xì)胞，可以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平，可以利用特定染料分析細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡，利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位，利用DHE等染料檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平。

三、流式細(xì)胞儀通道

　　流式細(xì)胞儀Beckman Coulter CytoFLEX；光學(xué)參數(shù)：FSC（前散射）、SSC（側(cè)散射）、4色熒光通道；數(shù)據(jù)采集軟件：CytExpert。

激發(fā)波長(zhǎng)	通道	發(fā)射波長(zhǎng)	常見(jiàn)染料
488 nm	FL1	525±20 nm	FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488
	FL2	585±21 nm	PE、PI、DsRed
	FL3	690±25 nm	PerCP-Cy5.5、PC5
638 nm		660±10 nm	APC、Alexa Fluor 647

四、結(jié)果展示

細(xì)胞周期

細(xì)胞凋亡

ROS檢測(cè)

JC-1線粒體膜電位

五、樣品保存運(yùn)輸

　　1、流式樣本接收注意事項(xiàng)

　?、偌?xì)胞凋亡

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光，一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注，否則按照無(wú)熒光處理。如果因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi)，我方概不負(fù)責(zé)，也不接受退單。

　?、诩?xì)胞周期

　　周期需要細(xì)胞量比較多，6 孔板送樣要求匯合度在70%以上，但不能超過(guò)90%。外地樣品，需用預(yù)冷的70% 乙醇固定過(guò)夜后（貼壁細(xì)胞需要消化后進(jìn)行固定），離心棄固定液，加1ml PBS重懸，封口膜封好，4℃運(yùn)輸寄到實(shí)驗(yàn)室。

　?、哿魇絁C-1

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶紅光或綠光，不能檢測(cè)。

　?、?nbsp;流式ROS

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶綠光，不能檢測(cè)。

　?、菁?xì)胞表抗

　　提前確定公司是否有相應(yīng)流式抗體(組化抗體不可用)，其他抗體需要客戶(hù)自己提供(外地樣本不接)。

　?、?nbsp;流式三標(biāo)

　　提前告知樣本具體數(shù)量和類(lèi)型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內(nèi)染色至少需要1.5 ml，表抗需要約1 ml)，注意防止凝血，4℃保存運(yùn)輸。血樣4℃保存最多只能存放一周，時(shí)間越久實(shí)驗(yàn)結(jié)果越差。取血后，需盡快寄到實(shí)驗(yàn)室;取脾臟時(shí)盡量將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，直接在實(shí)驗(yàn)室取材后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，若不能將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，取材(整個(gè)脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中，4℃保存，提細(xì)胞必須在取材后6 小時(shí)以?xún)?nèi)完成，注意有些檢測(cè)指標(biāo)(Treg,TH1, TH2 等)需無(wú)菌提取。外地樣本不接。

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