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細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

一、項(xiàng)目介紹

  細(xì)胞 (cell)是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位,已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成,因此,對(duì)細(xì)胞的深入研究是揭開(kāi)生命奧秘、改造生命和征服疾病的關(guān)鍵。以細(xì)胞為研究對(duì)象,從細(xì)胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個(gè)層次,研究細(xì)胞和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細(xì)胞的生活史和各種生命活動(dòng)規(guī)律頗具意義。

二、樣品保存運(yùn)輸(寄送細(xì)胞時(shí)請(qǐng)下載資料中心樣品寄送信息單《細(xì)胞送樣單》并填寫好發(fā)送給平臺(tái)助理)

  1、活細(xì)胞運(yùn)輸方法

  請(qǐng)用如圖所示不透氣培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞, 待細(xì)胞匯合度達(dá)到70% 左右時(shí),灌滿新鮮培養(yǎng)基至接近瓶口處,擰緊瓶蓋,封口膜進(jìn)一步封住瓶口。瓶身上做好標(biāo)記(細(xì)胞名稱,培養(yǎng)基,日期等)。打包時(shí)必需做防震處理。常溫寄送。

  2、凍存細(xì)胞運(yùn)輸方法

  一定要保證干冰充足(2-3天寄送時(shí)間,8-10kg干冰較充足),凍存管確保被干冰完全覆蓋。切勿凍融。勿將水冰混入干冰件中。

  3、流式樣本接收注意事項(xiàng)

  ①細(xì)胞凋亡

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光,一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注,否則按照無(wú)熒光處理。如果因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi),我方概不負(fù)責(zé),也不接受退單。

  ②細(xì)胞周期

  周期需要細(xì)胞量比較多,6 孔板送樣要求匯合度在70%以上,但不能超過(guò)90%。外地樣品,需用預(yù)冷的70% 乙醇固定過(guò)夜后(貼壁細(xì)胞需要消化后進(jìn)行固定),離心棄固定液,加1ml PBS重懸,封口膜封好,4℃運(yùn)輸寄到實(shí)驗(yàn)室。

  ③流式JC-1

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個(gè)空白孔,做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶紅光或綠光,不能檢測(cè)。

  ④流式ROS

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個(gè)空白孔,做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶綠光,不能檢測(cè)。

  ⑤細(xì)胞表抗

  提前確定公司是否有相應(yīng)流式抗體(組化抗體不可用),其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。

  ⑥流式三標(biāo)

  提前告知樣本具體數(shù)量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內(nèi)染色至少需要1.5 mL,表抗需要約1 ml),注意防止凝血,4℃保存運(yùn)輸。血樣4℃保存最多只能存放一周,時(shí)間越久實(shí)驗(yàn)結(jié)果越差。取血后,需盡快寄到實(shí)驗(yàn)室;取脾臟時(shí)盡量將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室,直接在實(shí)驗(yàn)室取材后開(kāi)始實(shí)驗(yàn),若不能將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室,取材(整個(gè)脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中,4℃保存,提細(xì)胞必須在取材后6 小時(shí)以內(nèi)完成,注意有些檢測(cè)指標(biāo)(Treg,TH1, TH2 等)需無(wú)菌提取。外地樣本不接。

  4、質(zhì)粒、RNA類、病毒類

  質(zhì)粒載體、miRNA、siRNA等-20℃寄送。

  慢病毒:-80℃保存、 充足純干冰寄送。

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