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ELISA假陰性假陽(yáng)性,無(wú)外乎這些
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法，該方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。
但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果）。引起 ELISA 測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論:
血清是最常用的 ELISA 標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。
內(nèi)源性物質(zhì)
1.類(lèi)風(fēng)濕因子
人血清中 IgM、IgG 型類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）可以與 ELISA 系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的 FC 段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2.補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其 FC 段的補(bǔ)體 C1q 分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使 C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。
3.嗜異性抗體
人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將 ELISA 系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。
4.嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。
5.醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體
臨床開(kāi)展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠 Ig (s) 抗體。這些病人 ELISA 測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。
6.交叉反應(yīng)物質(zhì)
類(lèi)地高辛、類(lèi) AFP 樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
7.其他
標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。
外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA 測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過(guò)久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
1.標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。
2.標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
3.標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP 可形成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性；
標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。
4.標(biāo)本凝集不全
臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在 ELISA 測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果；這類(lèi)情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已完全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴?/span>
5.標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如 NaN3 可抑制 ELISA 系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對(duì) ELISA 測(cè)定有一定干擾作用。
上海恒遠(yuǎn)生物（專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)免疫試劑盒生產(chǎn)廠家）提供高靈敏度試劑盒，其ELISA試劑盒不僅檢測(cè)指標(biāo)豐富，還可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求定制檢測(cè)范圍，并且提供實(shí)驗(yàn)外包與免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。
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