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ELISA試劑盒變質(zhì)原因詳解
ELISA試劑盒為什么會(huì)變質(zhì)？是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？
一、辦法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定形式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其間競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時(shí)差所引起的競(jìng)爭(zhēng)等要素的影響，成果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難操控。
二、試劑要素
不同批次的ELISA試劑在制作進(jìn)程中很難保證質(zhì)量完全一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)成果也存在差異，因而必須挑選和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一規(guī)范可以防止因試劑批號(hào)改動(dòng)而從頭建立質(zhì)控體系及從頭評(píng)估試劑的雜亂進(jìn)程，并且能夠保證成果的穩(wěn)定性；關(guān)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，防止重復(fù)凍融造成試劑的失效。
三、樣本要素
標(biāo)本攪擾要素包含內(nèi)源性攪擾要素和外源性攪擾要素，前者包含類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、本身抗體、溶菌酶等，后者包含標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝結(jié)不全、冷凍標(biāo)本的重復(fù)凍融等。
四、操作要素
ELISA操作步驟雜亂，操作不當(dāng)將引起較大的差錯(cuò)。加樣、溫育、洗刷、顯色、比色。
五、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性試驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告成果，兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判別值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定成果報(bào)告的根據(jù)。
六、標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測(cè)進(jìn)程雜亂，影響要素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也或許因孔間差異而造成成果的差異，因而加大復(fù)查力度是保證成果準(zhǔn)確性的牢靠辦法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及罕見(jiàn)形式的檢測(cè)成果進(jìn)行復(fù)查。
七、常表明成果的常用辦法
a.定性測(cè)定
b.半定量測(cè)定 成果一般以滴度表明。
c.定量測(cè)定 即用已知量的規(guī)范品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，制作規(guī)范曲線，成果以肯定量或單位表明。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須制作相應(yīng)的規(guī)范曲線。
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